前言: 目的研究乙肝检测的 血清 标志物、 病毒 前S1 抗原 和HBV - DNA 检测的关系和运用价值.方法对1163例乙肝患者血清分别进行乙肝病毒标志物(HBVM)、前S1抗原和... 患者血中HBeAg、HBV-DNA、前S1抗原在总检出率上有关联,但在载量水平上三者不一...
维普资讯 http:// ? 4 9 8 ? Me d L d b S c i . D e c e mb e t 2 0 0 4 , V o l 2 2 , N o 6 ? 论 著? 乙型肝 炎血清标 志物 、 前 S抗原 与病毒载量 的关 系及意义 崔 鲂 胥 飚 陈宏础 文 献标识 码 A 文章 编号 1 0 0 8 — 0 0 2 3 ( 2 0 0 4 } 0 6 — 0 4 9 8 — 0 3 中图分类 号 R 4 4 6 . 6 2 , R 3 7 3 . 2 ’ I , R 5 1 2 . 6 " 2 【 摘要】目的 研究乙肝检测的血清标志物 、 病毒1 】 { _ f S l 抗原和 H B V — D N A检测的关系和运用价值。方 法 对 l 1 6 3 例乙肝患者血清分别进行乙肝病毒标志物( H B V M) 、 前S l 抗原和 H B V — D N A水平的测定 . 并对 结果进行比较。
结果 H B V — D N A总检出率为 6 2 . 9 %,显著高于前 S l 抗原总检出率 ( 5 3 . O %) ,显著高于 H B e A g ( 3 5 . 3 %) 。患 者 血中 H B e A g 、 H B V — D N A、 前S l 抗 原在 总检 出率上有 关联 . 但在 载量 水平 上三 者不 一 定 平 行 。
结论 乙肝 病毒 标志物 ( H B V M) 、 前S l 抗原、 P C R荧光定 量技 术在判 断 乙肝 的复制 和传染 性 中各 有 优势 , 要综 合 多方 面的结果 , 方可作 出确切 的判 断和治 疗 。
【 关键词】 慢性乙型肝炎; H B V — D N A ; H B e A g ; P r e — S Co mp a r i s o n a n d c l i n i c a l s i g n i ic f a n c e o f d e t e c t i o n s o f t h r e e h e p a t i t i s B ma r k e r s CU I F a n g , B i a o . C HE N H o n g c h u . e F i r s t A f i f l i a t e d H o s p i t a l o f C h o n g q i n g Me d i c l a U n i v e r s i t y , C h o n g q i n g 4 0 0 0 1 6 .C h i n a 【 Ab s r a c t 】 Ob j e c t i v e T o c o mp a r e t h e d e t e c t i o n a n d c l i n i c a l s i g n i i f c a n c e o f t h r e e i n d e x e s o f h e p a t i t i s B v i r u s — HB V M.P r e S1 a n t i g e n a n d HB V— DNA.M e t h o d s l 1 6 3 s a mp l e s f r o m t h e p a t i e n t s wi t h HB V we r e t e s t e d f o r t h e p r e s e n c e o f s e r u m ma r k e r s 。
P r e S l a n d HBV— DNA. a n d t h e i r r e s u l t s we r e a n a l y s e d .Re s u l t s T h e p o s i t i v e r a t e o f HB V— DNA w a s 6 2 . 9 % .I t w a s s h o we d s i g n i i f c a n t l y h i g h e r t h a n t h o s e o f P r e S l a n t i g e n ( 5 3 . 0 %) a n d H B e A g ( 3 5 . 3 %) r e s p e c t i v e l y . T h e r e w e r e c o r r e l a t i o n s a mo n g t h e t o t a l d e t e c t i o n r a t e s o f HBe Ag ,P r e S1 a n t i g e n a n d HB V— DNA。b u t t h e r e we r e n o c o n ' e l a t i o n s a mo n g t h e q u a n t i t i e s o f HB e Ag . P r e S 1 a n t i g e n a n d HB V— DNA. Co n c l u s i o n HB V M,P r e S1 a n t i g e n a n d HB V— DNA c a n r e s p e c t i v e l y s e r v e t h e v a l u a b l e ma r k e r o f h e p a t i t i s B v i r u s r e p l i c a t i o n a n d i n f e c t i o n . 【 Ke y wo r d s 】 C h r o n i c h e p a t i t i s B ; HB V — D NA ; H B e A g ; P r e S l 应用 E L I S A法测定 H B V感染 者血清 中乙肝病 3 方 法 毒 标 志物 ( H B V M) , 其 结 果 对评估 H B V感 染 者病 毒复制 、 转归 、 预后 等情 况有一定 局限性 。笔者应用 乙肝前 S l 抗原 检测试 剂 由上海 阿 尔法生 物技 术有 限公 司提供 .采用双抗夹 心酶联 免疫吸附测定 H B V — D N A、 前S l 抗 原两种 指标 , 对 l 1 6 3例 门诊 病 法( E L I S A ) , 以固相化 的 S 单 抗捕获标本 中的乙肝 S 人进行 H B V M、 乙肝 病毒 前 S l 抗原 、 H B V — D N A的 抗 原 、辣根过 氧化 物酶标记 的抗 一 前S l 单抗 为二抗 检测 , 并 对三种指标检测结果相互关系进行 了探讨 。
来检测前 S l 抗原 ,用 B i o — R a d 公司 3 5 5 0型酶标仪 材 料 和 方 法 4 5 0 n m波长 比色 。结果判断 :
临界值 ( c u t o f ) = 2 . 1 x 阴 性对照平均 O D值 , 分别计算测试标 本的 O D f  ̄e u t . o f f , 大 于或 等于 1 为阳性 , 小于 1 为阴性 。
乙肝 血清 学 标 志 物 H B s A g 、抗 一 H B s 、 H B e A g 、 抗一 H B e 和抗 一 H B c 检测 均采用 E L I S A法 . 试 剂 由上 l 标本 来 源 l 1 6 3 例 乙肝 病 毒感 染 血清 来 自本 院 门诊 和传染科 , 各项检查在 当天完成。1 0 0 例健康 人J 0 l 清选 自我院健康体检人群 ( 乙肝血清标志物 为 全阴 H B s A b ( + ) ) 2 仪器 美 国 E I A — B I O公 司产 3 5 5 0型酶 标仪 . 美国 A B I 7 0 0 0 全 自动荧 光定量分 析仪。
作 者单 位 :
4 0 0 0 1 6 重 庆 医科大学 附属 第一 医院检验 科 海科华 实业生物有 限公 司提供 。
H B V D N A检{ 贝 4 采用荧 光定量 P C R法 .试 剂 由 中 山大 学达 安基 因股 份 有 限公 司提 供 。模 板 提取 离 心分离 血清 ,取 4 0 1 x l m 清于 1 . 5 m l 离心管 中 , 加 作者简介 :
崔鲂 , 男, 3 2 岁, 检验师 , 毕业 于重庆医科大学 , 主 要从 事分 子生 物学 检验 。
4 0 p , 1 D N A提取 液 , 沸水浴 煮 l 0分钟 , l 1 0 0 0 r / m i n离 维普资讯 http:// 工 西 医学检 验 2 0 0 4 年1 2 月 第2 2 卷 第6 期 ? 4 9 9 ? 心 5 分 钟 。反应 取 上清 液 2 P 1 加 入反 应管 中 . 混 对照。
匀, 瞬时离心 。循环 参数为 9 3 c c 预变性 2 分钟 . 9 3 c c 4 5 秒, 5 5 c c 6 0 秒, 1 0 次循环后 . 然后再进行 9 3 c c 3 0 4 统计学方法 率 的显著性 检验用 检验 . m清 前S 1 抗 原和 I I B V D N A两者相关性分析用 S P S S 1 0 . 0 结 果 秒, 5 5 c c 4 5秒 , 3 0次循环后 。
最后 3 0个循环测定荧 统计软件处理 。
光量。
同时用 1 × 1 0 , 1 × 1 0 , 1 × 1 0 4 D N A拷 贝数个/ l 的定量液进行护增检测 .以扩增前后 的荧光差值 为 准 曲线 , 并计算 山标本 中的 D N A拷贝。同时设 阴性 1 1 1 6 3 例I f I L 清标志物 、前 S 1 抗 原和 H B V — D N A 由表 中数据 可见 I 组:
H B s A g ( + ) 、 H B e A g ( + ) 、 纵坐 标 , 拷 贝数为横 坐标 . 在由 A B I 7 0 0 0自动作 标 检测结果如下 :
表 1 E L I S A和 P C R法检 测 H B V m 【 清标志 物 的结 平均 值 为阳性 标本 的对数平 均 值。
H B c A b( + ) ,m 清多数 H B V — D N A > 1 0 拷 贝/ m l , I I 组:
H B s A g ( + ) 、 H B e A b ( + ) 、 H B c A b ( + ) l f l 1 . 清 阳性 多数 出牢 4 4 . 1 %. 两 者有 显著 性差 异 ( X 。
= 1 8 . 4 , P < 0 . 0 1 ) , 前P r e — S 1 在 H B V — D N A阳性组 的检 山率 为 7 5 . 3 %, H B V — D N A < 1 0 , l l I 组:
H B s A g ( + ) 、 抗一 H B c阳性 多 数 为 阴性 . 阳性 标本 H B V — D N A < 1 0 s 拷 贝/ m 1 . 1 V组 :
抗 H B s ( + ) 、 H B e A b ( + ) 、 抗 H B c ( + ) 标本基本为阴性 。
V组 为对 照组 。
表 2 不 同组 别人 群中 H B e A g 和H B V — D N A检 出率 比较 明显高 于 H B V — D N A在 阴性组 的检 出率 1 5 . 1 %, 两 者有 显 著性 差 异 ( = 1 9 . 8 5 , P < 0 . 0 1 ) , 前 S 1 抗 原 同 H B V — D N A符合率为 7 8 . 8 %( 9 1 7 / 1 1 6 3 ) 。两者总体 检 出率有关联 ( X = 1 9 . 8 5 . P < 0 . 0 1 ) , P r e — S 1 在H B e A g 阳 性 组 的检 出率为 9 1 . 2 %. 明显 高于 H B e A g 阴性组 的 检 山率 3 2 . 0 %.两 者有 显 著性 差 异 ( X = 1 9 . 3 2 , P < 0 . 0 1 ) , H B e A g同 P r e — S 1 抗原符合率为 7 6 . 2 %( 8 8 6 / 1 1 6 3 ) 。两者总体检 出率有关联 ( X 。
= 1 9 . 3 2 , P < 0 . 0 1 ) 。
3 H B e A g 、前 s 1 抗原 和 H B V — D N A同时 阳性标 表 3 不同组 别人 群 巾前 S l 抗 原和 H B V — D N A检出 牢 比较 本两 者含量相关 性分析 。把 H B e A g , i S 1 抗原 的标 本O D值/ c u t o f比值拟 定为 H B e A g / 前S 1 抗 原 的相 对滴 度 . 1 1 6 3例 B e A g 相对 滴度 与 H B V — D N A含 量 不存 在 明 显相 关性 ( r = 0 . 1 1 2 , P > 0 . 0 5 ) 、 前s 1 抗 原相 表 4 不 同组 别人 群中 H B e A g 和前 S l 抗原 检出率 比较 对滴度与 H B V — D N A含量也不存 在明显相关性 ( r :
= 0 . 1 4 9 , P > 0 . 0 5 ) 。
讨 论 我 国是 H B V感染的高发 区 .人群 中 H B e A g阳 性 率高 达 1 0 %以上 ,在 H B V M中 , H B s A g 、 H B e A g B V在进行 复制 、包装 过程中产生 的蛋 白成分 , 2 l 1 6 3 例血清 H B e A g 、前 S 1 抗原 和 H B V — D N A 是H H B s A g 存 在并 不一 定表示 有传 染性 ,而 H B e A g是 检 出率 比较和相关性分析 。
B V核心 内部成分 .可作为体 内 H B V处于 复制状 l 1 6 3例标 本 中 H B V — D N A总检 出率 为 6 2 . 9 % H L I S A检 测结 果 组合 来 ( 7 3 2 / 1 1 6 3 ) , 前s 1 抗原 总检 出率 为 5 3 . 0 %( 6 1 6 / 1 1 6 3 ) , 态 的标 志 。从 清 标本 物 E 第 1 组H B V — D N A与 P r e — S 1 蛋 白的检 山率分别 H B e A g 总检 出率为 3 5 . 3 %( 4 1 1 / 1 1 6 3 ) 。
H B e A g 阳性组 看 , 8 . 3 %和 9 1 . 2 %.说 明这组 患者存 在病 毒 的处 于 H B V — D N A及前 s 1 抗 原 阳性率 显著 高于 H B e A g 阴 为 9 性组 ( P < 0 . 0 1 ) 。
高复制 状态 。从 H B V — D N A定量结果 看 , D N A含量 分布成正偏 态 , 其 阳性 标本多数 大于 1 0 拷 贝/ m l 也 证明 了这一点 。
第 Ⅱ组 中 H B V . 一 D N A与 P r e — S 1 蛋 白 H B V— D N A在 H B e A g阳 性 组 的 检 山 率 为 9 8 . 3 %,明显高于 H B V — D N A在 H B e A g 阴性 组 的检 维普资讯 http:// J i a n g x i J . Me d L a b S c i . D e c e m l mr 2 0 0 4 . V o I 2 2 . N o 6 的检 出率分 别 为 4 4 . 3 %和 3 3 . 7 %。同时 H B V — D N A S l 抗 原符合 较好 , 但也有 1 9 . 7 %的 H B V — D N A阴性 定量结果也较低 ,其阳性标本多数小于 1 o 5 拷贝/ m l 患者可检出前 s 1 抗原 , 同时 2 4 . 7 %的乙型肝炎病毒 证实 了 部分 H B e A g 阴性 而 抗 一 H B e阳性/ 阴性 的 患 前 S l 抗原 阴性患者可检 山 H B V — D N A 。
说 明患者血 者仍存在着病毒复制 , 但H B V — D N A含量在 H B e A g 中H B e A g 、 H B V — D N A、乙型肝 炎病 毒前 S l 抗 原在 阳性组 明显 高于 H B e A g 阴性肮 H B e A g阳性I t ? 2 1 。第 检 出率上有一定关联 , 但 三者变化并不一致 。
Ⅲ组和第 Ⅵ组 H B V — D N A阳性率更低 。且 阳性标本 当乙肝病毒 为逃避宿 主的免疫反应 基因可发生 都小 于 l 0 拷 贝/ m l , 表明病 毒复制水平更低 。
实验证 明这些 含 H B e A g 阳性模式组 的乙肝患 者 H B V复制 最 活跃 。
是感染期 最危险的传染源 . 为此应该加 以积 极 医治。
变异 , 其所携带的 H B V变异毒株大多数 表现为在病 毒基 冈组 前 C区末端 1 8 9 6位 发生 G — A点 突变 。
产 生一个新 的终 止密码 子( T A G) , 阻断 了 HB e A g的形 成 。导致在临床上可 出现 H B e A g 缺陷 的 H B V』 0 【 清 型I 4 1 。
H B e A g 检测 为阴性 。H B V — D N A定量检 测是乙 乙型 肝 炎病 毒 前 S l 抗 原 存在 于 D a n e 颗 粒及 管状颗粒 的表 面 ,前 S l 抗原 与 H B V病毒 的复制相 关[ 3 1 。前 S 1 蛋 白主要 出现于 H B V病 毒复制期 , 含有 肝 病毒存 在和 复制 的直 接标 志 , H B V — D N A的 定量 检测 为乙肝病毒在体 内的动态研究提供 了依 据 。当 H B V — D N A定 量 检 测 时 反 应 体 系 中存 在 抑 制 物 , H B V — D N A发生变异 或 只能 对体 内存 在 H B V — D N A 水平较低 。
H B V — D N A不能 检山 , 病人仍带 有 乙肝病 肝细胞受体 , 在H B V感染细胞 和机体免疫应答 方面 起重要作 用 。在病 毒感 染机体 的整个 周期 中 。
前S l 蛋 白的独特 功能 ,使其能够较充分的反应机体 的体 液 免疫 状况 。
反 映病程 的转 归过程 . 急性肝 炎前 S l 毒且 存在传染性 的可能不 能监测。
H B V M. H B V — D N A和前 S l 抗原之 间的之 间的 抗原 阴转 是病毒清除 的最早迹象 .反之疾病将发展 至慢性 肝炎 。这是单- -N定 H B V — D N A所不 能做 到 检测结果有相互关联 。但所 表达的临床 意义并 不完 的。
本 实验证 明 , H B V的传染性与 乙肝病毒前 S l 抗 全一致 . 对不 同类型 H B V感染患者前 S l 抗原 , H B V B V — D N A的联合 动态检 测有助 于临床诊 断 、 原 阳性 率具有一致性 , 因此前 S l 阳性有助 于乙肝 病 M 和 H 毒肝炎 的诊 断 , 并可作为 H B V具有 传染性 的指标之 疗效 观察及预后判断 。
一 。 有很好 的独立参考 价值 。
H B V — D N A作 为 H B V的基 因组 成和复制模板 . 参 考 文 献 【 1 】J a r d i R ,B u t i M ,C o u ' i n a ,e t a 1 .Q u a n t i t a t i v e d e t e r m i n a t i o n H B V DN A i n c h r o n i c h e p a t i t i s B :
C o mp a r i s o n o f t h r e e m e t h o d s G a s t r o e n — 被认为是病毒复制和具有传染性的直接证据。将乙 型 肝炎病 毒前 S l 抗 原和 H B V — D N A平 行检测结 果 进行 比较分析 中可 以看 出。以 H B V — D N A定 量> 1 0 3 拷贝/ m l 为诊断标准 , H B V — D N A阳性患者 H B e A g 、 P r e — S 1 蛋 白的检 出率分 别为 5 5 . 1 %( 4 0 4 / 3 2 ) 、 7 5 . 2 % ( 5 5 1 / 7 3 2 ) ;两 者与 H B V — D N A的总 符合 率分 别 为 7 1 2 %( 8 2 8 / 1 1 6 3 ) 、 7 8 . 8 %( 9 1 7 / 1 1 6 3 ) 。
H B e A g阴性 的患 t e r o l l J ] . H e p a t o l , 1 9 9 8 , 2 1 ( 7 ) :
3 2 7 . I 2 1 尹华发, 卢缱溪, 高志 良. 不同血清学标志乙型肝炎病毒感染者病 毒 水平分 析I J J . 巾华传 染病 杂志, 2 0 0 0 , 1 8 ( 4 ) :
2 6 4 . I 3 1 P e t i t M , Z o u l i m F , C a p e I F , e t a 1 . V a r i a b l e e x p r e s s i o n o f P r e S 1 a n t i — g e n i n. s e r u m d u r i n g c h r o n i c h e p a t i t i s B v i r u s i n f e c t i o n :
An a c c U l '  ̄ t e m rk a e r f o r t h e l e v e l f o h e p a t i t i s B v i us r r e p l i c a t i o n I J I .H e p a t o l o g y , I 9 9 0 . I l :
8 0 9 . I 4 1 H u n t C M, Mc g i l J M , A l l e n M I . e t a 1 . C l i n i c a l r e l e v a n c e f o h e p a t i t i s B v i us r m u t a t i o n s [ J ] . P a y o l o g y , 2 0 0 0 , 3 1 :
1 0 3 7 . 者有 4 4 . 1 %可检 出 H B V — D N A. 3 2 . 0 %可 检 出乙型肝 炎病毒前 S 1 抗原。
而H B V — D N A同乙型肝炎病毒前 第八届全国诊断学教学改革暨临床实验诊断 全国高等院校诊断学教学咨询委员会委托吉林大学举办第八届全国诊断学教学改革研讨暨学术交流会,中心内容是实验 诊断学检查规范化和编写实验诊断学教材改革研讨。时间 2 0 0 5 年8 月 5日至 8 月1 0日, 会议语种 中、 英文 。地点吉林省长春 市。参加人员会国高等院校医学教学及其附属医院领导 、 内科 、 外科、 检验科 、 诊断学实验诊断学教研室教学人员, 省、 市级医院 和解放军驻军以上医院领导、 内科、 外科和检验科主任 。征文内容:
l 、 实验诊断学规范化检查的方案或设想:
按临床主要症状 、 体征, 疾病提出。2 、 包括以诊断学为主临床血液学 、 临床化学、 临床免疫学、 临床病原生物学和临床一般检查与实验诊断学新理 论、 新概念 、 新方法在临床应用巾的意义。3 、 对编写实验诊断学教材或教材性参考书以及对实验诊断学教学改革建议等。征文 可用科研报告、 临床分析、 专题述评和文献综述撰写。
每篇 4 0 0 0字左右, 附5 0 0字摘要, 用A 4纸 5号字打印和软盘一并在 2 0 0 5 年 6月 3 0日 i j i = j 寄长春市仙 台大街 1 2 6号, 吉林大学中 日联谊医院中国实验诊断学杂志社收, 信封上请注明“ 征文” 字样 。联络 人安治国、 李 实、 刘仲祥。邮编 1 3 0 0 3 3 , 电话, 传真 0 4 3 1 . - - 4 6 4 7 8 5 2 。E — m a i h Z S Z D @ c h i n a j o m - h a 1 . n e t . C F I
【文摘】目的 研究乙肝检测的血清标志物、病毒前S1抗原和HBV-DNA检测的关系和运用价值.方法 对1163例乙肝患者血清分别进行乙肝病毒标志物(HBVM)、前S1抗原和HBV-...
乙型肝炎血清标志物、前S抗原与病毒载量的关系及意义 [J];江西医学检验;2004年06... 泸州医学院学报;2011年04期 中国重要会议论文全文数据库 前10条1张炯善;杨宏志;...
·2068· 乙型肝炎病毒前S1抗原及乙肝病毒血清标志物的 检测结果分析 张少华 【摘要... 094例阳性率13.测的关系以及前S1抗原与HBsAg浓度的关系及临床意义, 05%,HBsAb阳...